IFI-44 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405329-ACT

L’IFI44 umano (proteina 44 indotta dall’interferone; IFI-44) è un gene stimolato dall’interferone, indotto a valle della segnalazione dell’interferone di tipo I e di tipo III, che integra input provenienti dalle vie dei recettori di riconoscimento del patogeno (pattern-recognition receptors), come i recettori di tipo RIG-I e l’asse cGAS–STING. L’espressione di IFI-44 è comunemente utilizzata come indicatore dei programmi trascrizionali antivirali guidati da JAK–STAT e di una più ampia attivazione dell’immunità innata. Livelli deregolati di IFI44 sono stati riportati in diversi contesti infiammatori e autoimmuni e in firme trascrizionali associate alle infezioni, collegandolo a una biologia dell’interferone rilevante per la malattia. In ambito di ricerca, IFI44 funge da “maniglia” molecolare per interrogare l’ampiezza della risposta all’interferone, la connettività delle reti dell’immunità innata e la regolazione genica responsiva allo stress.

IFI-44 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IFI44 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IFI-44 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IFI44 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IFI44, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IFI-44. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IFI44 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IFI-44 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IFI-44 nelle cellule tumorali con espressione di IFI44 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.