Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HXK I Plasmide Double Nickase (h): sc-401753-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HXK I Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HXK I Double Nickase Plasmid (h) e il HXK I Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HK1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HXK I Antibody (G-1): sc-46695
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HXK I Plasmide Double Nickase (h) | sc-401753-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HXK I Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401753-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’HK1 umano codifica l’esochinasi I (HXK I), un enzima associato alla membrana esterna mitocondriale che catalizza la fosforilazione del glucosio in glucosio-6-fosfato dipendente da ATP, impegnando il glucosio nella glicolisi e favorendone l’ingresso nella via del pentoso fosfato. Collegando l’utilizzo del glucosio alla domanda energetica cellulare e all’omeostasi redox, HXK I influenza il flusso metabolico, la produzione di NADPH e i precursori biosintetici che modellano la proliferazione e le risposte allo stress. HK1 partecipa inoltre alla fisiologia mitocondriale attraverso interazioni che possono modulare la segnalazione apoptotica e le vie di sopravvivenza cellulare. Alterazioni dell’espressione o della regolazione di HK1 sono state associate alla riprogrammazione metabolica osservata in diversi contesti rilevanti per la malattia, inclusi neurodegenerazione, danno ischemico e fenotipi glicolitici associati al cancro, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici del metabolismo del glucosio.
HXK I Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HK1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HK1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HK1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HK1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.