HUNK Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405786

Panoramica

HUNK (hormonally upregulated Neu-associated kinase) codifica una chinasi proteica serina/treonina della famiglia delle chinasi correlate ad AMPK, che integra la segnalazione indotta da fattori di crescita e ormoni con il comportamento delle cellule epiteliali. HUNK è stata collegata alla regolazione dei programmi di sopravvivenza cellulare, al mantenimento della polarità e a processi associati a vescicole/traffico intracellulare che influenzano adesione e migrazione, con connessioni riportate agli output delle reti PI3K–AKT e MAPK in contesti di stress e proliferazione. Un’espressione o un’attività deregolata di HUNK è stata osservata in diversi modelli legati al cancro, dove viene studiata per i suoi ruoli nell’adattamento delle cellule tumorali, nei tratti metastatici e nei fenotipi di risposta alle terapie. Inoltre, la biologia di HUNK è rilevante per il cross-talk tra vie di segnalazione chinasi nel tessuto mammario e in quello neurale, supportando studi meccanicistici sul riorientamento delle vie di segnalazione in stati cellulari rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HUNK (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HUNK in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HUNK insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HUNK a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HUNK.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HUNK per lo studio della segnalazione di HUNK, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HUNK critici per la funzione di HUNK
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HUNK per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HUNK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HUNK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HUNK. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HUNK Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HUNK (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HUNK per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HUNK definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.