HS3ST3B1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424928

Panoramica

Hs3st3b1 codifica l’eparan solfato–glucosamina 3-O-solfotransferasi 3B1 (HS3ST3B1), un enzima localizzato nel Golgi che aggiunge gruppi 3-O-solfato alle catene di eparan solfato. Questa modifica modula il legame dei proteoglicani a eparan solfato con fattori di crescita, chemochine e componenti della matrice extracellulare, plasmando processi di segnalazione e adesione quali la modulazione delle vie FGF e VEGF e la comunicazione cellula–cellula. Alterazioni dei pattern di solfatazione dell’eparan solfato sono state associate a gradienti di morfogeni deregolati, segnalazione infiammatoria e interazioni tumore–stroma, rendendo HS3ST3B1 rilevante per studi sulla regolazione del microambiente e sulla specificità recettore–ligando. Nei sistemi murini, la perturbazione di Hs3st3b1 consente di interrogare i meccanismi alla base delle relazioni struttura–funzione dei glicosaminoglicani nello sviluppo e nell’omeostasi tissutale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HS3ST3B1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Hs3st3b1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Hs3st3b1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Hs3st3b1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HS3ST3B1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Hs3st3b1 per lo studio della segnalazione di HS3ST3B1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Hs3st3b1 critici per la funzione di HS3ST3B1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Hs3st3b1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HS3ST3B1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal HS3ST3B1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Hs3st3b1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HS3ST3B1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR HS3ST3B1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Hs3st3b1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Hs3st3b1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.