HoxB9 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401770-ACT

HOXB9 codifica il fattore di trascrizione homeobox HoxB9, una proteina che si lega al DNA in modo sequenza-specifico e che regola la patterning antero-posteriore, la morfogenesi dei tessuti e le decisioni di destino cellulare durante lo sviluppo. Nelle cellule umane, HOXB9 contribuisce a programmi trascrizionali che influenzano differenziamento e proliferazione, integrandosi con reti regolatorie geniche di sviluppo più ampie, come le interazioni tra HOX e cofattori e il controllo, mediato dalla cromatina, di enhancer specifici di linea cellulare. Un’espressione deregolata di HOXB9 è stata associata ad alterazioni delle dinamiche epitelio-mesenchimali, della segnalazione angiogenica e di fenotipi invasivi in molteplici contesti tumorali, rendendolo un nodo utile per studiare il rimodellamento oncogenico dei programmi trascrizionali. In quanto regolatore nucleare, HoxB9 è spesso analizzato per il suo impatto sui circuiti di espressione genica che governano migrazione, rimodellamento della matrice extracellulare e stati “stem-like”.

HoxB9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HOXB9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HoxB9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HOXB9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HOXB9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HoxB9. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HOXB9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HoxB9 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HoxB9 nelle cellule tumorali con espressione di HOXB9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.