HoxB4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404013-ACT

HOXB4 codifica il fattore di trascrizione homeobox HoxB4, un regolatore che si lega al DNA e controlla i programmi di patterning antero-posteriore durante lo sviluppo embrionale, contribuendo anche al mantenimento delle reti trascrizionali che specificano la linea cellulare nelle popolazioni ematopoietiche e in altri progenitori. Nell’ambito dei circuiti regolatori dei geni HOX, HoxB4 influenza lo stato della cromatina e l’espressione coordinata di geni di differenziamento e di autorinnovamento, intersecandosi con vie di segnalazione che governano le decisioni sul destino delle cellule staminali e la tempistica dello sviluppo. Un’espressione deregolata di HOXB4 e un’alterata attività del cluster HOX sono state riportate in diverse neoplasie, inclusi i tumori ematologici, in cui programmi trascrizionali di tipo sviluppo, aberranti, possono contribuire a un differenziamento compromesso e a segnali proliferativi. Queste caratteristiche rendono HOXB4 un nodo utile per analizzare il controllo genico dello sviluppo, la regolazione epigenetica e la riprogrammazione trascrizionale oncogenica in modelli cellulari umani.

HoxB4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HOXB4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HoxB4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HOXB4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HOXB4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HoxB4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HOXB4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HoxB4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HoxB4 nelle cellule tumorali con espressione di HOXB4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.