HoxA10 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-420900-ACT

Hoxa10 codifica il fattore di trascrizione homeobox HoxA10, un regolatore che si lega al DNA in modo sequenza-specifico e che contribuisce a definire l’asse antero-posteriore durante l’embriogenesi, aiutando a specificare l’identità regionale nei sistemi urogenitale ed ematopoietico in sviluppo. Nei tessuti adulti, HoxA10 partecipa ai programmi di impegno di linea e di differenziamento coordinando reti trascrizionali con cofattori come PBX e MEIS, influenzando lo stato della cromatina e l’espressione genica a valle. Un’alterata espressione di HOXA10 è stata associata ad anomalie dello sviluppo e a stati di differenziamento deregolati, rendendolo un nodo utile per studiare il controllo trascrizionale della morfogenesi e le decisioni di destino cellulare nei modelli murini. La sua attività interseca vie che governano proliferazione e differenziamento, supportando la ricerca sulla regolazione genica dipendente dal contesto nello sviluppo e in fenotipi rilevanti per la malattia.

HoxA10 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Hoxa10 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HoxA10 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Hoxa10 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Hoxa10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HoxA10. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Hoxa10 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HoxA10 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HoxA10 nelle cellule tumorali con espressione di Hoxa10 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.