hnRNP K Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-417266-ACT

HNRNPK codifica la ribonucleoproteina nucleare eterogenea K (hnRNP K), una proteina multifunzionale legante gli acidi nucleici che coordina la trascrizione, lo splicing del pre‑mRNA, la stabilità dell’mRNA e la traduzione attraverso interazioni con elementi RNA/DNA poli(C) e con diversi partner di segnalazione. hnRNP K integra segnali provenienti da vie come MAPK/ERK e dalle reti della risposta al danno al DNA per modulare programmi di espressione genica associati alla cromatina e un processamento dell’RNA adattativo allo stress. Agendo da scaffold per complessi ribonucleoproteici, influenza la progressione del ciclo cellulare, l’apoptosi e la differenziazione. Un’espressione o una funzione disregolata di HNRNPK è stata associata ad alterazioni della regolazione genica oncogena e neuroevolutiva, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici della biologia dell’RNA e del controllo trascrizionale dipendente dai segnali.

hnRNP K Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HNRNPK senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

hnRNP K Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HNRNPK nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HNRNPK, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di hnRNP K. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HNRNPK nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da hnRNP K nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via hnRNP K nelle cellule tumorali con espressione di HNRNPK silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.