hnRNP A1 Plasmide Double Nickase (m): sc-420895-NIC

Il gene murino Hnrnpa1 codifica la ribonucleoproteina nucleare eterogenea A1 (hnRNP A1), una proteina legante l’RNA espressa ubiquitariamente che coordina lo splicing del pre-mRNA, l’esportazione dell’mRNA e la traduzione tramite interazioni dinamiche con componenti dello spliceosoma e con granuli ribonucleoproteici. hnRNP A1 regola la scelta alternativa degli esoni e programmi del metabolismo dell’RNA che influenzano la progressione del ciclo cellulare, le risposte allo stress e il mantenimento dell’omeostasi dell’RNA. La sua attività è collegata al trasporto nucleo-citoplasmatico e all’assemblaggio dei granuli di stress, mettendo in relazione l’elaborazione dell’RNA con vie attivate durante lo stress cellulare e la differenziazione. La disregolazione dello splicing mediato da hnRNP A1 e del legame all’RNA è stata associata a neurodegenerazione e a rimodellamenti trascrizionali rilevanti per il cancro, rendendola un nodo utile per studi meccanicistici dei difetti nell’elaborazione dell’RNA.

hnRNP A1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Hnrnpa1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Hnrnpa1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Hnrnpa1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Hnrnpa1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.