hnRNP A1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400704-NIC

HNRNPA1 codifica la ribonucleoproteina nucleare eterogenea A1 (hnRNP A1), una proteina multifunzionale legante l’RNA che si associa ai pre-mRNA per regolare lo splicing alternativo, l’esportazione dell’mRNA e la traduzione. hnRNP A1 partecipa all’assemblaggio dello spliceosoma e alla definizione degli esoni, e contribuisce anche al mantenimento dei telomeri attraverso interazioni con l’RNA contenente ripetizioni telomeriche e con fattori che legano il DNA telomerico. Coordinando la processazione e il metabolismo dell’RNA, hnRNP A1 influenza la dinamica dei granuli di stress e programmi più ampi di espressione genica legati alla crescita e alla differenziazione cellulare. La deregolazione di HNRNPA1 è stata implicata nella neurodegenerazione e in alterazioni della processazione dell’RNA rilevanti per il cancro, rendendolo un bersaglio utile per analizzare le reti di splicing dell’RNA e le vie della proteostasi.

hnRNP A1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HNRNPA1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HNRNPA1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HNRNPA1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HNRNPA1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.