HMG-I/HMG-Y Plasmide Double Nickase (m): sc-420879-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HMG-I/HMG-Y Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HMG-I/HMG-Y Double Nickase Plasmid (m) e il HMG-I/HMG-Y Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Hmga1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HMG-I/HMG-Y Antibody (D-12): sc-393213
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HMG-I/HMG-Y Plasmide Double Nickase (m) | sc-420879-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HMG-I/HMG-Y Plasmide Double Nickase (m2) | sc-420879-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Hmga1 codifica la proteina architetturale associata alla cromatina HMG-I/HMG-Y, un fattore di legame al DNA tramite domini AT-hook che rimodella la struttura locale della cromatina e facilita l’assemblaggio degli enhanceosomi in regioni regolatorie ricche in AT. Modulando l’accesso dei fattori di trascrizione e l’organizzazione della cromatina di ordine superiore, HMG-I/HMG-Y influenza programmi di espressione genica che governano la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e la trascrizione in risposta allo stress, incluse le vie a valle di MAPK e di altri segnali mitogenici. Nei modelli murini, l’attività di Hmga1 è spesso studiata nel contesto della regolazione dello sviluppo e del controllo epigenetico delle reti trascrizionali specifiche di linea. Una funzione deregolata di HMGA1/HMG-I/HMG-Y è stata collegata a stati trascrizionali aberranti associati alla trasformazione oncogenica e a una plasticità cellulare alterata, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico in studi di regolazione genica rilevanti per la malattia.
HMG-I/HMG-Y Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Hmga1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Hmga1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Hmga1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Hmga1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.