HLA-C Plasmide Double Nickase (h): sc-401517-NIC

HLA-C codifica una catena pesante classica dell’MHC di classe I che si associa alla β2-microglobulina per presentare sulla superficie cellulare peptidi di origine endogena, consentendo la sorveglianza da parte dei linfociti T CD8+. Oltre alla presentazione dell’antigene, HLA-C funge da ligando principale per i recettori immunoglobulinici tipo killer (KIR) inibitori e attivatori, modellando l’educazione delle cellule natural killer (NK) e le soglie di citotossicità. Attraverso questi processi di riconoscimento immunitario, HLA-C si integra con le vie di processamento e presentazione dell’antigene guidate dall’interferone, inclusa la generazione proteasomiale dei peptidi e il caricamento dipendente da TAP nel reticolo endoplasmatico. La variazione genetica e l’alterata espressione di HLA-C sono associate alla suscettibilità a malattie immunomediate e infiammatorie e influenzano le interazioni ospite–patogeno, rendendolo un locus chiave per studi meccanicistici della regolazione immunitaria.

HLA-C Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HLA-C nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HLA-C. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HLA-C. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HLA-C interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.