Histone H3.3A Plasmide Double Nickase (m): sc-420787-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Histone H3.3A Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Histone H3.3A Double Nickase Plasmid (m) e il Histone H3.3A Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira H3f3a. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Histone H3.3A Plasmide Double Nickase (m) | sc-420787-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Histone H3.3A Plasmide Double Nickase (m2) | sc-420787-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino H3f3a codifica l’istone H3.3A, una variante di H3 indipendente dalla replicazione che viene depositata in corrispondenza di geni attivamente trascritti, enhancer e altri elementi regolatori, contribuendo a modulare l’accessibilità della cromatina e la fedeltà trascrizionale. Il turnover di H3.3A partecipa alla dinamica dei nucleosomi durante la trascrizione, alle risposte allo stress da replicazione del DNA e al riassemblaggio della cromatina dopo danno al DNA, collegandola a processi quali stabilità del genoma, transizioni del destino cellulare e differenziamento. La sua deposizione si interfaccia con vie di regolazione epigenetica che coordinano l’attività della RNA polimerasi II, la funzione degli enhancer e i complessi di rimodellamento della cromatina. La disregolazione della biologia di H3.3 e dei pattern di modificazioni post-traduzionali è ampiamente rilevante in modelli di disturbi dello sviluppo e di stati cromatinici oncogeni, in cui programmi trascrizionali alterati e difetti nella manutenzione del genoma costituiscono fenotipi centrali.
Histone H3.3A Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus H3f3a nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di H3f3a. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di H3f3a. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con H3f3a interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.