Histone Deacetylase 4 (HDAC4) Plasmide Double Nickase (m): sc-431586-NIC

Il gene murino *Hdac4* codifica l’istone deacetilasi 4 (HDAC4), una HDAC di classe IIa che si sposta tra nucleo e citoplasma per collegare la fosforilazione dipendente dai segnali alla regolazione della cromatina. HDAC4 agisce principalmente come corepressore trascrizionale associandosi a fattori quali MEF2, modulando programmi genici dipendenti dall’acetilazione che controllano la miogenesi, la trascrizione neuronale regolata dall’attività e lo sviluppo scheletrico. La sua localizzazione e attività integrano la segnalazione delle chinasi Ca2+/calmodulina-dipendenti e delle proteine 14-3-3, collegando segnali extracellulari al controllo epigenetico della differenziazione e delle risposte allo stress. Reti trascrizionali dipendenti da HDAC4 deregolate sono state implicate in fenotipi di neurosviluppo e neurodegenerazione, nel rimodellamento cardiaco e in patologie muscolari in modelli murini, supportandone l’uso come nodo meccanicistico negli studi su cromatina e segnalazione.

Histone Deacetylase 4 (HDAC4) Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Hdac4 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Hdac4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Hdac4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Hdac4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.