HIP-55 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404008-ACT

Il gene umano **DBNL** codifica **HIP-55** (simile alla drebrina), una proteina adattatrice legante l’actina che collega la segnalazione prossimale al recettore al rimodellamento dinamico del citoscheletro. HIP-55 partecipa all’endocitosi e al traffico vescicolare e interagisce con vie di segnalazione a valle dei recettori immunitari e dei fattori di crescita, coordinando la deformazione della membrana guidata dall’actina e l’assemblaggio di complessi proteici. Attraverso questi ruoli, DBNL influenza la motilità cellulare, l’adesione e la propagazione del segnale, processi spesso alterati in condizioni infiammatorie e in fenotipi associati al cancro. Un’espressione o una localizzazione deregolate di HIP-55 sono state associate, in modelli rilevanti per la malattia, a modifiche dell’invasività cellulare e dell’attivazione delle cellule immunitarie.

HIP-55 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DBNL senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HIP-55 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DBNL nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DBNL, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HIP-55. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DBNL nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HIP-55 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HIP-55 nelle cellule tumorali con espressione di DBNL silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.