HIF1a Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400036-LAC

HIF1A codifica il fattore inducibile dall’ipossia 1 alfa (HIF1a), un fattore di trascrizione centrale sensibile all’ossigeno che integra le risposte cellulari a basse tensioni di ossigeno. In condizioni di ipossia, HIF1a stabilizzato dimerizza con ARNT e si lega agli elementi di risposta all’ipossia per regolare geni che controllano angiogenesi, glicolisi, eritropoiesi, omeostasi del pH e sopravvivenza cellulare, intersecandosi con le vie PI3K–AKT–mTOR, MAPK e con i pathway di proteostasi mediati da VHL. L’attività di HIF1a modella la riprogrammazione metabolica, la funzione mitocondriale e la gestione delle specie reattive dell’ossigeno, influenzando le decisioni sul destino cellulare in microambienti di stress. Una segnalazione di HIF1A deregolata è ampiamente associata alla biologia patologica dell’ipossia, inclusi l’adattamento tumorale, il rimodellamento infiammatorio, lo stress cellulare associato all’ischemia e risposte vascolari e fibrotiche aberranti.

Le particelle di attivazione lentivirale HIF1a (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di HIF1A in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale HIF1a (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione HIF1A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di HIF1a. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo HIF1A e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.