HGK Plasmide Double Nickase (h): sc-403395-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HGK Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HGK Double Nickase Plasmid (h) e il HGK Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MAP4K4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HGK Antibody (5-12): sc-100445
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HGK Plasmide Double Nickase (h) | sc-403395-NIC | 20 µg | $410.00 |
MAP4K4 codifica la chinasi serina/treonina HGK, un regolatore a monte della segnalazione responsiva allo stress che collega segnali prossimali alla membrana alle cascate MAPK, incluse le vie JNK e p38. HGK contribuisce al rimodellamento del citoscheletro, alla migrazione cellulare, alla segnalazione infiammatoria e alla regolazione metabolica attraverso la modulazione di reti di chinasi e di nodi di segnalazione dipendenti da adattatori. Nelle cellule umane, un’attività alterata di MAP4K4 è stata associata a cambiamenti nella segnalazione dell’insulina, nel comportamento delle cellule endoteliali e immunitarie e a effetti dipendenti dal contesto su proliferazione e invasione. Queste proprietà rendono MAP4K4/HGK un bersaglio utile per analizzare la connettività delle vie guidate da chinasi e per mappare le dipendenze di segnalazione in modelli cellulari rilevanti per la malattia.
HGK Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MAP4K4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MAP4K4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MAP4K4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MAP4K4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.