HGF Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400433

Panoramica

Il fattore di crescita degli epatociti (HGF) è una citochina pleiotropica secreta che si lega al recettore tirosin-chinasico MET per regolare la comunicazione epitelio–mesenchimale, la motilità cellulare, la sopravvivenza, la proliferazione e la morfogenesi. La segnalazione HGF–MET attiva le vie MAPK/ERK, PI3K–AKT, STAT e le GTPasi della famiglia Rho per coordinare il rimodellamento tissutale, la riparazione delle ferite e lo sviluppo degli organi. Un’espressione deregolata di HGF o un’attivazione aberrante della via è associata a programmi di crescita invasiva, interazioni stroma–tumore e a microambienti angiogenici e infiammatori alterati in molteplici contesti patologici. In quanto fattore paracrino prodotto da cellule mesenchimali, HGF è spesso studiato in sistemi di co-coltura e con mezzi condizionati per indagare le dinamiche di segnalazione guidate dal microambiente.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HGF (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HGF in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HGF insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HGF a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HGF.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HGF per lo studio della segnalazione di HGF, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HGF critici per la funzione di HGF
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HGF per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HGF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HGF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HGF. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HGF Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HGF (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HGF per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HGF definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.