Hck Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420810

Panoramica

Il gene Hck del topo codifica la hematopoietic cell kinase, una tirosin-chinasi non recettoriale della famiglia Src, arricchita nelle linee mieloidi, che collega i segnali provenienti da immunorecettori e integrine a reti di fosforilazione a valle. Hck partecipa a vie legate ai recettori Fc e ai recettori Toll-like che coordinano il rimodellamento del citoscheletro, la fagocitosi, la degranulazione e la produzione di mediatori infiammatori, convergendo su nodi quali PI3K/AKT, MAPK e NF-κB. Un’attività alterata di Hck è stata associata a una segnalazione dell’immunità innata deregolata e a un comportamento anomalo delle cellule mieloidi in condizioni infiammatorie e in modelli di leucemia. In quanto chinasi di segnalazione prossimale, Hck è ampiamente utilizzata per studiare i meccanismi che controllano l’attivazione, l’adesione e la migrazione di macrofagi e neutrofili.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Hck (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Hck in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Hck insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Hck a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Hck.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Hck per lo studio della segnalazione di Hck, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Hck critici per la funzione di Hck
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Hck per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Hck CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Hck CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Hck. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Hck Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Hck (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Hck per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Hck definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.