GSTA1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403681-NIC

La glutatione S-transferasi alfa 1 (GSTA1) è un enzima citosolico di detossificazione di fase II che catalizza la coniugazione del glutatione a xenobiotici elettrofili e a prodotti endogeni della perossidazione lipidica, facilitandone l’inattivazione e l’eliminazione. Contribuisce all’omeostasi redox e alla protezione dallo stress ossidativo limitando l’accumulo di aldeidi reattive e modulando le risposte cellulari al danno indotto dagli elettrofili. L’attività di GSTA1 si interfaccia con il metabolismo del glutatione e con programmi antiossidanti più ampi, incluse le vie coordinate dalla segnalazione NRF2/KEAP1. Alterazioni nell’espressione o nella funzione di GSTA1 sono state associate a variabilità interindividuale nel metabolismo dei farmaci e nella suscettibilità a danno epatico indotto da sostanze tossiche, a supporto della sua rilevanza nella farmacogenomica e nei modelli di stress epatocellulare.

GSTA1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GSTA1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GSTA1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GSTA1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GSTA1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.