GSH-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-407550-ACT

Il gene umano **GSX2 (GSH-2)** codifica un fattore di trascrizione homeobox che regola la patterning regionale e la specificazione delle linee neuronali durante lo sviluppo del prosencefalo, con ruoli di rilievo nell’identità dei progenitori del telencefalo ventrale e nei programmi di differenziazione degli interneuroni. Legandosi a elementi cis-regolatori e coordinando reti trascrizionali con altri regolatori dello sviluppo, GSH-2 contribuisce a controllare le transizioni dalla proliferazione alla differenziazione e i moduli di espressione genica a valle che plasmano la formazione dei circuiti neurali. Un’attività di GSX2 deregolata o un’espressione alterata durante lo sviluppo è stata collegata a fenotipi del neurosviluppo attraverso la perturbazione delle reti di regolazione genica che governano le decisioni di destino neuronale. In quanto marcatore e driver funzionale degli stati dei progenitori neurali, GSX2 è ampiamente studiato in modelli di differenziazione da cellule staminali e nella mappatura dei circuiti trascrizionali.

GSH-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GSX2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GSH-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GSX2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GSX2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GSH-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GSX2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GSH-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GSH-2 nelle cellule tumorali con espressione di GSX2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.