GSG1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420702

Panoramica

Il gene murino Gsg1 codifica GSG1, una proteina di membrana associata alle cellule germinali, arricchita nel testicolo e collegata alle fasi tardive della spermatogenesi. Le evidenze biologiche disponibili supportano un ruolo nella differenziazione delle cellule germinali maschili e nella maturazione degli spermatozoi, coinvolgendo processi cellulari quali l’organizzazione delle membrane, il traffico proteico e il rimodellamento spermiogenico. Poiché la corretta espressione dei geni della spermatogenesi è essenziale per la fertilità, l’alterazione di Gsg1 è rilevante per lo studio dei fenotipi riproduttivi maschili, inclusi i meccanismi associati all’infertilità e la regolazione genica specifica del testicolo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GSG1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Gsg1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Gsg1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Gsg1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GSG1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Gsg1 per lo studio della segnalazione di GSG1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Gsg1 critici per la funzione di GSG1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Gsg1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GSG1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal GSG1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Gsg1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GSG1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR GSG1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Gsg1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Gsg1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.