GSDMDC1 Plasmide Double Nickase (h): sc-406596-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GSDMDC1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GSDMDC1 Double Nickase Plasmid (h) e il GSDMDC1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GSDMD. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GSDMDC1 Antibody (H-11): sc-393581
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GSDMDC1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-406596-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GSDMDC1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-406596-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GSDMD codifica la gasdermina D, un effettore formante pori che viene attivato proteoliticamente a valle della segnalazione dell’inflammasoma e del clivaggio da parte delle caspasi-1/4/5/11 per eseguire la morte cellulare piroptotica. Una volta attivato, il frammento N-terminale oligomerizza nella membrana plasmatica formando pori che inducono flussi ionici, rigonfiamento cellulare e il rilascio di mediatori pro-infiammatori, come le citochine della famiglia dell’IL-1, collegando il riconoscimento immunitario innato agli esiti infiammatori. Questa via interseca la segnalazione dei recettori di riconoscimento del pattern, il priming mediato da NF-κB e l’attivazione dell’inflammasoma non canonico, modellando la difesa antimicrobica e l’infiammazione sterile. Un’attività deregolata della gasdermina D è implicata nella biologia delle malattie infiammatorie e infettive ed è ampiamente studiata nelle cellule mieloidi, nelle barriere epiteliali e nei microambienti tumorali-immune.
GSDMDC1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GSDMD nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GSDMD. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GSDMD. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GSDMD interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.