GRP Plasmide Double Nickase (h): sc-402811-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GRP Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GRP Double Nickase Plasmid (h) e il GRP Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GRP. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GRP Antibody (E-11): sc-271045
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GRP Plasmide Double Nickase (h) | sc-402811-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GRP Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402811-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il peptide di rilascio della gastrina (GRP) è un neuropeptide secreto che segnala principalmente attraverso il recettore del GRP (GRPR), un GPCR che attiva la cascata fosfolipasi C–IP3/DAG–PKC, mobilizza Ca2+ intracellulare e coinvolge le vie MAPK/ERK e PI3K/AKT per modulare l’eccitabilità cellulare, la secrezione e la proliferazione. Nel sistema nervoso e nei tessuti neuroendocrini periferici, il GRP contribuisce alla neurotrasmissione, alle risposte circadiane e legate allo stress, e alla regolazione della muscolatura liscia e della funzione gastrointestinale. Una deregolazione del segnale GRP–GRPR è stata implicata nella differenziazione neuroendocrina e in programmi mitogeni in diversi contesti tumorali, ed è anche studiata nei circuiti sensoriali coinvolti in prurito e dolore. Queste caratteristiche rendono il GRP un nodo utile per analizzare la segnalazione autocrina/paracrina mediata da peptidi, il crosstalk tra vie di segnalazione dei GPCR e le risposte trascrizionali dipendenti dallo stimolo.
GRP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GRP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GRP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GRP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GRP interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.