GRP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402811

Panoramica

Il peptide di rilascio della gastrina (GRP) è un neuropeptide che trasmette segnali attraverso la famiglia dei recettori della bombesina, principalmente il GRPR, regolando i flussi intracellulari di calcio, l’attività della fosfolipasi C e le vie di segnalazione a valle MAPK/ERK e PI3K-AKT. Nei tessuti umani, il GRP contribuisce alla comunicazione neuroendocrina, all’omeostasi epiteliale e alla modulazione delle risposte secretorie e contrattili. Una segnalazione GRP–GRPR disregolata è stata associata ad alterazioni della proliferazione, della migrazione e delle risposte neuroinfiammatorie, rendendo il GRP un nodo rilevante negli studi sulla segnalazione oncogenica e sul crosstalk tra tumore e microambiente. L’espressione e la processazione del GRP si intrecciano inoltre con la maturazione degli ormoni peptidici e con le vie di secrezione regolata, supportandone l’uso come marcatore di stati neuroendocrini e della plasticità di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GRP (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GRP in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GRP insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GRP a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GRP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GRP per lo studio della segnalazione di GRP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GRP critici per la funzione di GRP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GRP per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GRP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GRP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GRP. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GRP Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GRP (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GRP per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GRP definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.