GRK 5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401285-ACT

A GRK5 humana (quinase 5 de receptores acoplados à proteína G) é uma quinase de serina/treonina que fosforila GPCRs ativados para regular a dessensibilização do receptor, a internalização e a amplitude da sinalização a jusante. Além do controle canônico de GPCRs, a GRK5 pode influenciar vias dependentes de β-arrestina e modular nós de sinalização ligados a processos regulados por Ca2+, respostas inflamatórias e adaptação celular ao estresse. A atividade da GRK5 molda o crosstalk entre vias, afetando redes de sinalização cardiovasculares e neurobiológicas, e alterações na expressão ou na regulação da GRK5 têm sido associadas a fenótipos relevantes para doenças, incluindo remodelamento cardíaco e disfunção neurológica. Essas funções tornam a GRK5 um alvo útil para dissecar viés de sinalização de receptores, cinética de terminação do sinal e programas transcricionais dependentes do contexto.

GRK 5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GRK5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GRK 5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GRK5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GRK5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GRK 5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GRK5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GRK 5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GRK 5 em células tumorais com expressão de GRK5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.