GRB2 Plasmide Double Nickase (h): sc-400482-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GRB2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GRB2 Double Nickase Plasmid (h) e il GRB2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GRB2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GRB2 Antibody (C-7): sc-8034
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GRB2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400482-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GRB2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400482-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GRB2 codifica la growth factor receptor-bound protein 2, una proteina adattatrice che collega le tirosin-chinasi recettoriali attivate e i recettori immunitari alla segnalazione a valle tramite i suoi domini SH2 e SH3. Collegando recettori contenenti fosfotirosina a SOS e ad altri effettori, GRB2 promuove la segnalazione RAS–RAF–MEK–ERK e interagisce con PI3K/AKT, con l’endocitosi e con i percorsi di rimodellamento del citoscheletro che coordinano proliferazione, differenziamento e migrazione. L’integrazione dei segnali dipendente da GRB2 è spesso oggetto di studio in ricerche sulla deregolazione oncogenica delle vie RTK/RAS, sulla segnalazione mitogena aberrante e sulle alterazioni del traffico recettoriale. La perturbazione della funzione di GRB2 può inoltre influenzare l’attivazione delle cellule immunitarie e la segnalazione di risposta allo stress, rendendola un nodo comune per la mappatura dei pathway e per analisi di rete a livello di sistemi.
GRB2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GRB2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GRB2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GRB2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GRB2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.