GPRC5B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (r): sc-437288

Panoramica

GPRC5B (recettore accoppiato a proteine G di classe C, gruppo 5, membro B) è una proteina di membrana simile a un GPCR orfano, implicata nella regolazione della segnalazione cellulare e del traffico di membrana in molteplici tessuti, tra cui cervello, tessuto adiposo e compartimenti rilevanti per il sistema immunitario. È stata associata alla modulazione dell’attività delle vie MAPK/ERK e PI3K–AKT, influenzando processi quali proliferazione, differenziazione e segnalazione infiammatoria. In biologia metabolica, GPRC5B è collegata alla segnalazione insulinica e alla funzione degli adipociti, e sono state riportate alterazioni della sua espressione in contesti di obesità e fenotipi cardiometabolici correlati. I suoi pattern di espressione e le connessioni di segnalazione la rendono inoltre rilevante per lo studio della neuroinfiammazione e delle vie sensibili allo stress in modelli cellulari e fisiologici di ratto.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GPRC5B (r) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene in linee cellulari rat. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GPRC5B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di per lo studio della segnalazione di GPRC5B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni critici per la funzione di GPRC5B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GPRC5B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r) e dal GPRC5B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus . Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GPRC5B Plasmide HDR (r) e il plasmide HDR GPRC5B (r2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.