Plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR55 (m): sc-432690

Présentation

Le gène murin **Gpr55** code **GPR55**, un récepteur orphelin couplé aux protéines G largement étudié dans le réseau de signalisation lié au système endocannabinoïde et sensible à des médiateurs lipidiques tels que le lysophosphatidylinositol. GPR55 se couple à **Gα12/13** et **Gαq**, ainsi qu’aux voies en aval **RhoA–ROCK** et **PLCβ–Ca2+**, influençant le remodelage du cytosquelette, la migration et des programmes transcriptionnels, dont la signalisation **MAPK/ERK**. Dans les contextes immunitaires et stromaux, l’activité de GPR55 a été associée à la modulation de la signalisation inflammatoire, à l’équilibre ostéoclastes/ostéoblastes et à l’excitabilité neuronale. Une signalisation associée à GPR55 dérégulée a été étudiée dans des modèles de douleur, de phénotypes métaboliques, de troubles osseux et de remodelage tissulaire lié à l’inflammation, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans la recherche sur les voies des GPCR.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR55 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Gpr55 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Gpr55, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Gpr55 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GPR55.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Gpr55 pour l'étude de la signalisation de GPR55, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Gpr55 essentiels à la fonction de GPR55
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Gpr55 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GPR55 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le GPR55 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Gpr55. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GPR55 plasmide HDR (m) et le GPR55 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Gpr55 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Gpr55 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.