GPR55 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-432690

Panoramica

Il gene murino **Gpr55** codifica **GPR55**, un recettore accoppiato a proteine G orfano ampiamente studiato nella rete di segnalazione correlata al sistema endocannabinoide e responsivo a mediatori lipidici come la lisofosfatidilinositolo. GPR55 si accoppia a Gα12/13, Gαq e alle vie a valle RhoA–ROCK e PLCβ–Ca2+, influenzando il rimodellamento del citoscheletro, la migrazione e programmi trascrizionali che includono la segnalazione MAPK/ERK. In contesti immunitari e stromali, l’attività di GPR55 è stata collegata alla modulazione della segnalazione infiammatoria, all’equilibrio osteoclasti/osteoblasti e all’eccitabilità neuronale. Una segnalazione associata a GPR55 deregolata è stata studiata in modelli di dolore, fenotipi metabolici, patologie ossee e rimodellamento tissutale associato all’infiammazione, supportandone l’impiego come nodo meccanicistico nella ricerca sulle vie dei GPCR.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR55 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Gpr55 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Gpr55 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Gpr55 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GPR55.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Gpr55 per lo studio della segnalazione di GPR55, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Gpr55 critici per la funzione di GPR55
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Gpr55 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GPR55 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal GPR55 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Gpr55. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GPR55 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR GPR55 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Gpr55 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Gpr55 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.