GPR40 Plasmide Double Nickase (h): sc-401434-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GPR40 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GPR40 Double Nickase Plasmid (h) e il GPR40 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FFAR1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GPR40 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401434-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPR40 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401434-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FFAR1 codifica GPR40, un recettore GPCR di classe A sensibile ai lipidi e altamente responsivo agli acidi grassi liberi a catena media e lunga. Dopo l’attivazione, GPR40 si accoppia principalmente a Gαq/11 per stimolare la segnalazione della fosfolipasi C, aumentare il Ca2+ intracellulare e attivare vie dipendenti da PKC che modulano l’accoppiamento stimolo–secrezione e reti più ampie di segnalazione metabolica. Nei tessuti umani, l’attività di FFAR1 è strettamente legata alla regolazione, guidata dai nutrienti, dell’omeostasi endocrina e metabolica, con collegamenti di ricerca alla funzione delle cellule β, alla dinamica della secrezione di insulina e all’adattamento della segnalazione indotta dai lipidi. Un’alterata percezione degli acidi grassi e la segnalazione a valle dipendente dal Ca2+ sono state studiate nel contesto dei meccanismi delle malattie metaboliche, inclusi il diabete di tipo 2 e la resistenza all’insulina associata all’obesità, nonché il rimodellamento metabolico legato all’infiammazione.
GPR40 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FFAR1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FFAR1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FFAR1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FFAR1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.