GPR105 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405954

Panoramica

P2RY14 codifica GPR105, un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) responsivo agli zuccheri UDP, che rileva zuccheri nucleotidici extracellulari come l’UDP-glucosio e ligandi correlati. La segnalazione di GPR105 si accoppia principalmente alle vie Gi per modulare la dinamica del cAMP, la chemiotassi e i programmi genici infiammatori, collegando lo stress tissutale e il rilascio di metaboliti al comportamento delle cellule immunitarie. L’espressione è arricchita nelle popolazioni leucocitarie ed è stata associata alla regolazione delle risposte immunitarie innate e adattative, incluse le funzioni di macrofagi e cellule dendritiche. Un’attività deregolata di P2RY14/GPR105 è stata implicata in microambienti infiammatori e in meccanismi immuno-correlati rilevanti per contesti di patologie cardiometaboliche e polmonari.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR105 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene P2RY14 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del P2RY14 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto P2RY14 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GPR105.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di P2RY14 per lo studio della segnalazione di GPR105, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni P2RY14 critici per la funzione di GPR105
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di P2RY14 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GPR105 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GPR105 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus P2RY14. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GPR105 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GPR105 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia P2RY14 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio P2RY14 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.