golgin 97 Plasmide Double Nickase (h): sc-403152-NIC

GOLGA1 codifica la golgina 97, una golgina a coiled-coil che si localizza alla rete trans-Golgi (TGN) e funziona da tether vescicolare per coordinare il traffico retrogrado endosoma-Golgi e l’organizzazione delle membrane del Golgi. Attraverso interazioni con piccole GTPasi e fattori di tethering, la golgina 97 contribuisce a mantenere l’accuratezza dello smistamento, il riciclo dei cargo e il traffico polarizzato che supportano la secrezione e l’omeostasi delle proteine di membrana. L’alterazione del tethering del Golgi e del trasporto retrogrado è ampiamente associata a risposte di stress cellulare, a una segnalazione recettoriale modificata e a difetti nel processamento proteico. In quanto componente della rete di traffico endomembranosa, la golgina 97 è spesso oggetto di studio in ricerche sull’integrità del Golgi, sulla dinamica degli organelli e su fenotipi dipendenti dal traffico, rilevanti per la neurodegenerazione, la biologia delle infezioni e la biologia delle cellule tumorali.

golgin 97 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GOLGA1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GOLGA1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GOLGA1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GOLGA1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.