GILZ Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401424-ACT

TSC22D3 codifica la glucocorticoid-induced leucine zipper (GILZ), un regolatore sensibile allo stress e agli ormoni che collega la segnalazione del recettore dei glucocorticoidi al controllo trascrizionale dei programmi immunitari e infiammatori. GILZ modula vie di segnalazione tra cui NF-κB e AP-1, influenzando l’espressione di citochine, l’attivazione delle cellule T e la polarizzazione dei macrofagi, e può incidere sulla sopravvivenza e sulla differenziazione cellulare attraverso interazioni con nodi di segnalazione correlati a MAPK e PI3K/AKT. Un’espressione alterata di TSC22D3/GILZ è stata associata a stati infiammatori disregolati e a patologie immuno-mediate, ed è spesso studiata in contesti in cui sono rilevanti la risposta ai glucocorticoidi, la tolleranza o i meccanismi di immunosoppressione. Queste proprietà rendono GILZ un utile strumento molecolare per analizzare le reti trascrizionali che governano l’infiammazione, l’adattamento allo stress e le funzioni immunitarie specifiche di linea nelle cellule umane.

GILZ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TSC22D3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GILZ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TSC22D3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TSC22D3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GILZ. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TSC22D3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GILZ nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GILZ nelle cellule tumorali con espressione di TSC22D3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.