Gigaxonin Plasmide Double Nickase (h): sc-407001-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Gigaxonin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Gigaxonin Double Nickase Plasmid (h) e il Gigaxonin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GAN. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Gigaxonin Antibody (F-3): sc-376173
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Gigaxonin Plasmide Double Nickase (h) | sc-407001-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Gigaxonin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-407001-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GAN codifica gigaxonin, una proteina adattatrice della famiglia BTB-Kelch per i complessi E3 ubiquitina ligasi basati su CUL3, che promuove l’ubiquitinazione e la degradazione proteasomiale di specifici substrati. Gigaxonin è un regolatore chiave dell’omeostasi dei filamenti intermedi e delle proteine associate ai microtubuli, sostenendo l’organizzazione del citoscheletro assonale e l’integrità neuronale. Attraverso il controllo delle vie di qualità proteica e della dinamica del citoscheletro, gigaxonin influenza processi quali il mantenimento dell’assone, il trasporto intracellulare e le risposte allo stress. Varianti con perdita di funzione in GAN sono associate alla neuropatia assonale gigante, un disturbo neurodegenerativo caratterizzato da un accumulo anomalo di filamenti intermedi e da patologia assonale.
Gigaxonin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GAN nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GAN. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GAN. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GAN interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.