GHR Plasmide Double Nickase (h): sc-401382-NIC

GHR codifica il recettore dell’ormone della crescita, un recettore citochinico transmembrana a singolo passaggio che lega l’ormone della crescita ipofisario per regolare la crescita postnatale, il metabolismo e l’omeostasi tissutale. La dimerizzazione del recettore indotta dal ligando attiva JAK2 e la segnalazione a valle mediata da STAT5, con un ulteriore accoppiamento alle vie PI3K–AKT e MAPK/ERK che modulano proliferazione, sopravvivenza e programmi trascrizionali. La segnalazione di GHR influenza la produzione epatica di IGF-1 e circuiti più ampi di feedback endocrino, integrando lo stato nutrizionale con risposte anaboliche e lipolitiche. L’attività deregolata di GHR e il crosstalk tra vie di segnalazione sono stati studiati in contesti che includono disturbi della crescita, fenotipi di sensibilità all’insulina e reti di segnalazione oncogeniche, in cui gli output JAK/STAT e MAPK contribuiscono a stati cellulari rilevanti per la malattia.

GHR Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GHR nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GHR. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GHR. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GHR interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.