GGCX Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407037

Panoramica

GGCX (gamma-glutamil carbossilasi) è un enzima di membrana del reticolo endoplasmatico che catalizza la γ-carbossilazione, dipendente dalla vitamina K, dei residui di glutammato, generando domini Gla necessari per il legame con il calcio. Questa modificazione post-traduzionale è essenziale per la maturazione e l’attività di molte proteine secrete, inclusi i fattori della coagulazione e altre proteine vitamina K–dipendenti, collegando GGCX all’emostasi, alla funzione delle proteine extracellulari e al ciclo redox all’interno della via della vitamina K. L’attività di GGCX interseca l’elaborazione proteica nel RE e il controllo qualità della via secretoria, perché una carbossilazione corretta influenza il ripiegamento delle proteine e l’efficienza di secrezione. L’alterazione genetica o funzionale di GGCX è stata associata a fenotipi emorragici e a una più ampia disfunzione delle proteine vitamina K–dipendenti, rendendolo un bersaglio utile per lo studio della biologia della coagulazione e della regolazione post-traduzionale legata al RE.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GGCX (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GGCX in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GGCX insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GGCX a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GGCX.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GGCX per lo studio della segnalazione di GGCX, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GGCX critici per la funzione di GGCX
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GGCX per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GGCX CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GGCX CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GGCX. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GGCX Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GGCX (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GGCX per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GGCX definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.