GFRαL Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-415831

Panoramica

GFRAL (GDNF family receptor alpha-like) codifica un co-recettore ancorato alla glicosilfosfatidilinositolo (GPI) che conferisce specificità di ligando al recettore tirosin-chinasico RET, in particolare in risposta alla citochina da stress GDF15. La segnalazione di RET dipendente da GFRαL attiva a valle le vie MAPK/ERK e PI3K/AKT per regolare le risposte cellulari a stimoli metabolici e infiammatori, con particolare rilevanza per il controllo neuroendocrino dell’equilibrio energetico. L’espressione è arricchita in popolazioni neuronali discrete del rombencefalo, a supporto di ruoli nel sensing dei nutrienti e nell’omeostasi sistemica. La deregolazione dell’asse GDF15–GFRαL–RET è stata associata a fenotipi simili alla cachessia, disturbi metabolici ed effetti sistemici correlati al cancro, rendendo GFRAL un bersaglio utile per dissezionare la via di segnalazione in modelli rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GFRαL (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GFRAL in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GFRAL insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GFRAL a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GFRαL.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GFRAL per lo studio della segnalazione di GFRαL, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GFRAL critici per la funzione di GFRαL
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GFRAL per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GFRαL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GFRαL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GFRAL. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GFRαL Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GFRαL (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GFRAL per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GFRAL definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.