Gemin2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403867-ACT

Il gene umano **GEMIN2** codifica **Gemin2**, un componente centrale del complesso **SMN–Gemin** che coordina l’assemblaggio delle piccole ribonucleoproteine nucleari di classe Sm (**snRNP**) necessarie per la biogenesi dello spliceosoma e lo splicing del pre‑mRNA. Attraverso interazioni dirette con le proteine Sm e con SMN, Gemin2 contribuisce a controllare la maturazione degli snRNA, il controllo qualità degli snRNP e programmi più ampi di metabolismo dell’RNA che influenzano l’integrità del trascrittoma. L’alterazione della funzione del complesso SMN e dell’assemblaggio degli snRNP è collegata, dal punto di vista meccanicistico, alla neurodegenerazione e alla biologia dei motoneuroni, e **GEMIN2** è stato studiato nel contesto di difetti di processamento dell’RNA e delle risposte allo stress cellulare. La perturbazione di **GEMIN2** viene inoltre utilizzata per indagare come l’omeostasi dello spliceosoma rimodelli le reti di espressione genica rilevanti per proliferazione e differenziamento.

Gemin2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GEMIN2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Gemin2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GEMIN2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GEMIN2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Gemin2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GEMIN2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Gemin2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Gemin2 nelle cellule tumorali con espressione di GEMIN2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.