GDAP2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-412346-ACT

GDAP2 (proteina 2 associata alla differenziazione indotta dai gangliosidi) codifica una proteina conservata implicata nel mantenimento dei neuroni e nei programmi di differenziazione cellulare, con collegamenti emergenti all’omeostasi mitocondriale e alla segnalazione responsiva allo stress. I pattern di espressione e gli studi genetici supportano un ruolo nella neurobiologia, in cui un’alterata attività di GDAP2 può influenzare vie che regolano il metabolismo energetico, la dinamica degli organelli e la proteostasi. Varianti di GDAP2 sono state associate a fenotipi neurodegenerativi, incluse manifestazioni correlate all’atassia, evidenziandone la rilevanza per indagare i meccanismi della vulnerabilità neuronale. Nella ricerca biomedica, GDAP2 viene quindi utilizzato come bersaglio per esplorare reti di regolazione genica che intersecano la funzione mitocondriale e processi cellulari associati alla neurodegenerazione.

GDAP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GDAP2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GDAP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GDAP2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GDAP2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GDAP2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GDAP2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GDAP2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GDAP2 nelle cellule tumorali con espressione di GDAP2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.