GCNT4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-412177-ACT

GCNT4 (glucosaminil (N-acetil) transferasi 4) codifica una glicosiltransferasi residente nel Golgi che catalizza la ramificazione β1,6-N-acetilglucosamminica sugli O-glicani di tipo mucinico, contribuendo a modellare la struttura e l’abbondanza di glicoconiugati complessi sulla superficie cellulare e nelle mucine secrete. Modulando la ramificazione dei glicani, GCNT4 influenza il traffico delle glicoproteine, le interazioni recettore–ligando e la segnalazione mediata da lectine, con effetti a valle sulla differenziazione epiteliale, la funzione di barriera e l’adesione cellula–cellula. Programmi alterati di O-glicosilazione sono frequentemente associati a cambiamenti nel riconoscimento immunitario e a fenotipi glicani tumorali, rendendo GCNT4 un nodo rilevante per lo studio del rimodellamento dipendente dalla glicosilazione in contesti di malattia. I ricercatori analizzano comunemente l’attività di GCNT4 in vie che regolano la biosintesi delle mucine, la ramificazione dei glicani e la maturazione delle glicoproteine di membrana.

GCNT4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GCNT4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GCNT4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GCNT4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GCNT4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GCNT4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GCNT4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GCNT4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GCNT4 nelle cellule tumorali con espressione di GCNT4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.