Plasmide Double Nickase (h) GCK: sc-400852-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GCK correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GCK Double Nickase (h) et le plasmide GCK Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GCK. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GCK Antibody (G-6): sc-17819
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GCK | sc-400852-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GCK | sc-400852-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La glucokinase (GCK) code l’enzyme hexokinase IV, qui phosphoryle le glucose en glucose-6-phosphate. Elle agit comme un capteur clé du glucose, reliant la disponibilité extracellulaire en glucose au métabolisme cellulaire. Dans les cellules β pancréatiques, l’activité de GCK contribue à fixer le seuil de sécrétion d’insuline stimulée par le glucose, tandis que dans les hépatocytes elle soutient le flux glycolytique et la synthèse du glycogène via son intégration à la glycolyse, la régulation de la gluconéogenèse et les programmes métaboliques sensibles aux glucides. En contrôlant l’entrée du glucose dans le métabolisme central du carbone, GCK influence l’équilibre ATP/ADP, la signalisation métabolique et les voies en aval liées à la sécrétion d’insuline et à l’utilisation hépatique du glucose. Les perturbations génétiques et fonctionnelles de GCK sont fortement associées à des altérations de l’homéostasie du glucose et à des formes monogéniques de dysglycémie, ce qui en fait une cible largement utilisée pour les études mécanistiques de la régulation métabolique.
GCK Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GCK dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GCK. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GCK. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GCK.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.