GCK Plasmide Double Nickase (h): sc-400852-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GCK Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GCK Double Nickase Plasmid (h) e il GCK Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GCK. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GCK Antibody (G-6): sc-17819
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GCK Plasmide Double Nickase (h) | sc-400852-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GCK Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400852-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La glucokinasi (GCK) codifica l’enzima esochinasi IV, che fosforila il glucosio a glucosio-6-fosfato e funge da sensore chiave del glucosio, collegando la disponibilità extracellulare di glucosio al metabolismo cellulare. Nelle cellule β pancreatiche, l’attività di GCK contribuisce a determinare la soglia per la secrezione di insulina stimolata dal glucosio, mentre negli epatociti sostiene il flusso glicolitico e la sintesi di glicogeno attraverso l’integrazione con la glicolisi, la regolazione della gluconeogenesi e programmi metabolici responsivi ai carboidrati. Controllando l’ingresso del glucosio nel metabolismo centrale del carbonio, GCK influenza l’equilibrio ATP/ADP, la segnalazione mediata dai metaboliti e le vie a valle legate alla secrezione di insulina e all’utilizzo epatico del glucosio. Alterazioni genetiche e funzionali di GCK sono fortemente associate a cambiamenti dell’omeostasi del glucosio e a forme monogeniche di disglicemia, rendendola un bersaglio ampiamente utilizzato per studi meccanicistici della regolazione metabolica.
GCK Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GCK nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GCK. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GCK. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GCK interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.