GATA-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400396

Panoramica

GATA1 codifica GATA-1, un fattore di trascrizione a dita di zinco che si lega ai motivi WGATAR per controllare l’espressione genica specifica di linea durante l’ematopoiesi. È essenziale per la maturazione eritroide e la differenziazione dei megacariociti, coordinando programmi che regolano l’emoglobinizzazione, l’uscita dal ciclo cellulare e la differenziazione terminale attraverso l’interazione con cofattori come FOG1 (ZFPM1) e la modulazione del rimodellamento della cromatina. L’attività di GATA-1 si integra con la segnalazione eritropoietina/JAK–STAT e con reti trascrizionali più ampie per plasmare l’espressione genica eritroide e piastrinica. La disregolazione o le mutazioni di GATA1 sono strettamente rilevanti per disturbi dello sviluppo e della differenziazione delle cellule del sangue, incluse citopenie congenite e leucemie mieloidi caratterizzate da programmi eritroidi/megacariocitici alterati.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GATA-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GATA1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GATA1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GATA1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GATA-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GATA1 per lo studio della segnalazione di GATA-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GATA1 critici per la funzione di GATA-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GATA1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GATA-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GATA-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GATA1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GATA-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GATA-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GATA1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GATA1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.