Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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GAP-43 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400632
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GAP-43 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico GAP-43, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GAP-43 Antibody (B-5): sc-17790
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GAP-43 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-400632 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
GAP43 codifica la proteina 43 associata alla crescita (GAP-43), una fosfoproteina associata alla membrana, arricchita nei coni di crescita neuronali e nelle terminazioni presinaptiche, che sostiene la crescita dell’assone, la sua guida e il rimodellamento sinaptico. GAP-43 interagisce con la calmodulina ed è un importante substrato della PKC, collegando la segnalazione del calcio e il controllo, dipendente dalla fosforilazione, della dinamica del citoscheletro e del traffico vescicolare. Grazie ai suoi ruoli nell’estensione dei neuriti e nei programmi trascrizionali legati alla plasticità, GAP-43 è ampiamente utilizzata come marcatore di stati rigenerativi e di sviluppo nel sistema nervoso. Alterazioni dell’espressione e della fosforilazione di GAP-43 sono state studiate nel contesto di processi neuroevolutivi e neurodegenerativi in cui risultano compromesse la connettività sinaptica e la manutenzione assonale.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GAP-43 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GAP43 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GAP43 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GAP43 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GAP-43.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GAP43 per lo studio della segnalazione di GAP-43, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni GAP43 critici per la funzione di GAP-43
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GAP43 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal GAP-43 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GAP-43 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GAP43. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal GAP-43 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GAP-43 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GAP43 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GAP43 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.