gamma Synuclein/SNCG Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401050-ACT

SNCG codifica la gamma-sinucleina, una piccola proteina neuronale implicata nella funzione sinaptica, nella dinamica del citoscheletro e nel traffico vescicolare, con ruoli più ampi nelle risposte cellulari allo stress. In contesti non neuronali, la gamma-sinucleina è stata collegata alla modulazione della stabilità dei microtubuli, della propensione all’aggregazione proteica e di programmi di segnalazione che influenzano proliferazione e migrazione. Un’espressione deregolata di SNCG è stata riportata in molteplici tumori ed è spesso studiata come marcatore di progressione tumorale e potenziale metastatico, intersecandosi anche con vie rilevanti per la neurodegenerazione. Queste caratteristiche rendono SNCG un nodo utile per analizzare il controllo trascrizionale, la proteostasi e le reti di segnalazione associate al citoscheletro.

gamma Synuclein/SNCG Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SNCG senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

gamma Synuclein/SNCG Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SNCG nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SNCG, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di gamma Synuclein/SNCG. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SNCG nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da gamma Synuclein/SNCG nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via gamma Synuclein/SNCG nelle cellule tumorali con espressione di SNCG silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.