galectin-8 Plasmide Double Nickase (h): sc-401785-NIC

LGALS8 codifica per la galectina-8, una lectina legante i β-galattosidi a ripetizione tandem che funge da sensore glicano-dipendente del danno di membrana e da modulatore delle interazioni cellula–cellula e cellula–matrice. La galectina-8 partecipa all’autofagia selettiva riconoscendo i glicani esposti su endomembrane danneggiate e reclutando effettori a valle che promuovono la xenofagia e la rimozione di vescicole danneggiate. Influenza inoltre la segnalazione mediata dalle integrine, l’adesione cellulare e il traffico intracellulare, collegando il riconoscimento di glicoproteine extracellulari a vie intracellulari di risposta allo stress. Un’espressione deregolata di LGALS8 e la segnalazione mediata da lectine sono state associate a processi infiammatori, interazioni patogeno–ospite e fenotipi legati al cancro, quali alterazioni dell’adesione e dell’invasione, supportando studi meccanicistici in contesti immunitari ed epiteliali.

galectin-8 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LGALS8 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LGALS8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LGALS8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LGALS8 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.