Gads Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421689

Panoramica

Grap2 codifica la proteina adattatrice Gads, un componente della segnalazione ematopoietica che collega i recettori immunitari attivati alle vie effettrici a valle. Nelle cellule T, Gads accoppia LAT fosforilata a SLP-76 per assemblare microcluster di segnalazione che propagano la segnalazione prossimale del recettore delle cellule T, facilitando l’attivazione di PLCγ1, il flusso di calcio, la segnalazione MAPK e programmi trascrizionali che controllano la produzione di citochine e la proliferazione. Questo adattatore partecipa anche alla segnalazione di altri immunorecettori nelle linee linfoidi, influenzando le soglie di attivazione cellulare e l’organizzazione della sinapsi immunologica. Le reti di segnalazione dipendenti da Gads, quando deregolate, vengono spesso studiate in modelli di disfunzione immunitaria, fenotipi infiammatori e anomalie della segnalazione ematopoietica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Gads (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Grap2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Grap2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Grap2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Gads.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Grap2 per lo studio della segnalazione di Gads, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Grap2 critici per la funzione di Gads
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Grap2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Gads CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Gads CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Grap2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Gads Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Gads (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Grap2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Grap2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.