G530011O06Rik Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-437289-LAC

Mouse G530011O06Rik codifica una proteina in gran parte non caratterizzata, con annotazioni funzionali limitate, ed è spesso studiato nell’ambito di analisi trascrittomiche e di biologia dei sistemi volte a identificare nuovi regolatori dello stato cellulare. I dati di espressione disponibili suggeriscono una regolazione dipendente dal contesto, che potrebbe riflettere ruoli in processi di base quali il controllo trascrizionale, il metabolismo dell’RNA o reti geniche associate alla segnalazione. Poiché l’inquadramento del gene nelle vie biologiche rimane incompletamente definito, si ricorre spesso a studi basati su perturbazioni per mappare i programmi trascrizionali a valle e le vie di interazione. Alterazioni dei pattern di espressione di geni RIKEN poco caratterizzati come G530011O06Rik vengono comunemente investigate come biomarcatori o modulatori in modelli rilevanti per la malattia, inclusi infiammazione, stress metabolico e fenotipi neurobiologici, senza implicare un nesso di causalità.

Le particelle di attivazione lentivirale G530011O06Rik (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di G530011O06Rik in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale G530011O06Rik (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione G530011O06Rik, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di G530011O06Rik. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo G530011O06Rik e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.