G3BP1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400745-ACT

La G3BP1 umana (G3BP stress granule assembly factor 1) è una proteina legante l’RNA che innesca la formazione dei granuli di stress e coordina lo smistamento (“triage”) degli mRNA durante lo stress cellulare. Integra segnali provenienti dal controllo della traduzione e dalle vie dell’immunità innata regolando la stabilità degli mRNA, l’inizio della traduzione e il rimodellamento delle ribonucleoproteine, con effetti a valle su apoptosi, risposte antivirali e programmi del ciclo cellulare. G3BP1 partecipa a processi di adattamento allo stress legati all’arresto traslazionale mediato da eIF2α, alla segnalazione MAPK e al metabolismo dell’RNA; la sua disregolazione è stata associata ad alterata tolleranza allo stress e a proliferazione aberrante in diversi contesti patologici. Poiché G3BP1 collega l’elaborazione dell’RNA alla segnalazione responsiva allo stress, è ampiamente studiata in modelli di biologia tumorale, neurodegenerazione e interazioni ospite–patogeno.

G3BP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di G3BP1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

G3BP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus G3BP1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione G3BP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di G3BP1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus G3BP1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da G3BP1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via G3BP1 nelle cellule tumorali con espressione di G3BP1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.