FucT-IV Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401795

Panoramica

FUT4 codifica la fucosiltransferasi α1,3 residente nel Golgi FucT-IV, un enzima che trasferisce fucosio su accettori N-acetil-lattosamminici per generare epitopi glicani fucosilati, come strutture di tipo Lewis X, su glicoproteine e glicolipidi. Modellando la glicosilazione della superficie cellulare, FucT-IV influenza l’adesione mediata dalle selectine, il trafficking dei leucociti e, più in generale, la segnalazione dipendente dai glicani e la dinamica dei recettori. L’attività di FUT4 si interseca con il metabolismo del fucosio e con le vie di glicosilazione che regolano le interazioni tra cellule immunitarie, le risposte infiammatorie e la migrazione cellulare. In letteratura, una deregolazione dell’espressione di FUT4 e pattern alterati di fucosilazione sono stati associati all’invasività delle cellule tumorali, a fenotipi di adesione legati alla metastasi e a cambiamenti nelle interazioni con il microambiente immunitario, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici della biologia mediata dai glicani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FucT-IV (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FUT4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FUT4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FUT4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FucT-IV.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FUT4 per lo studio della segnalazione di FucT-IV, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FUT4 critici per la funzione di FucT-IV
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FUT4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FucT-IV CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FucT-IV CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FUT4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FucT-IV Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FucT-IV (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FUT4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FUT4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.