FUCA1 Plasmide Double Nickase (h): sc-405275-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FUCA1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FUCA1 Double Nickase Plasmid (h) e il FUCA1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FUCA1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: FUCA1 Antibody (G-12): sc-365496
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FUCA1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405275-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FUCA1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405275-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FUCA1 codifica l’alfa-L-fucosidasi 1 lisosomiale, un’esoglicosidasi che rimuove i residui terminali di fucosio da glicoproteine e glicolipidi durante il turnover dei glicani. Sostenendo il catabolismo dipendente dal lisosoma e il controllo qualità dei substrati fucosilati, FUCA1 influenza l’omeostasi cellulare, il traffico endo-lisosomiale e la composizione dei glicoconiugati di superficie cellulare e secreti. Un’attività alterata di FUCA1 è associata a una funzione lisosomiale compromessa e a pattern anomali di glicosilazione che possono influenzare l’adesione, la segnalazione recettoriale e i processi immuno-correlati. Nella ricerca biomedica, FUCA1 viene comunemente studiato in lavori sulla biologia delle malattie da accumulo lisosomiale, sulle vie di degradazione delle glicoproteine e sulle variazioni della fucosilazione associate a patologie.
FUCA1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FUCA1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FUCA1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FUCA1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FUCA1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.